MEDIOS DE CULTIVO.
Los medios de cultivo en microbiología
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura,
grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes
complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano.
Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de
carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea
mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos
materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa,
bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales:
para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la
sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos
menos resistentes.
También se añaden colorantes que actúan como indicadores
para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del
crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador
ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se
usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias
Gram-positivas).
Condiciones
generales para el cultivo de microorganismos
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio
de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que,
en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio.
1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigación
microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo
y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras
sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las
sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para
las reacciones químicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en
forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin
embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a los medios de
cultivo provocaban la pérdida de los factores nutritivos lábiles.
Actualmente, la forma más extendida de aportar estas
sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente
fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los
microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales,
tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de
nitrógeno presentes en la peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas
por lo que se añade a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido
ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales
minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica.
Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos
colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por
sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos
microorganismos.
2- consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su
consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que
obtendríamos medios en estado semisólido o sólido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran
inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a
temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros
tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su
versatilidad y comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo
uso está ampliamente extendido en el laboratorio.
3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros
gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera
con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de
variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se
desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones
atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras
los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
cualquiera de las citadas condiciones.
4- condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la
atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas
microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas
condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una
fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de
los cultivos y evitar así que se deseque el medio.
5- Luz ambiental
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la
oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el
caso de los microorganismos fotosintéticos.
6- pH
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para
el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor
en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos
ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que
no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso
alterar sus procesos metabólicos normales.
7- Temperatura
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a
temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los
temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas
generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más
cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.
8- Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente
estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar,
enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los
especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los
medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como
agente esterilizante)
"PRACTICA"http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm
A CONTINUACIÓN LES VOY A MOSTRAR LOS
MEDIOS DE CULTIVO QUE OCUPAMOS PARA REALIZAR ESTA PRACTICA CORRESPONDIENTE EN
EL LABORATORIO.
ESTOS MEDIOS DE CULTIVO SON AZUL
DE METILENO, INFUCIÓN CEREBRO CORAZÓN, AGAR+CBS CON ESTOS MEDIOS DE CULTIVO
REALIZAREMOS NUESTRAS PRACTICA CORRESPONDIENTE.
MATERIALES.
° AGAR AZUL DE
METILENO 36gx30/1000ml=1.08g
° AGAR INFUCIÓN CEREBRO
37x20/1000ml=0.74.
° AGAR+CBS 58x15/1000ml=1.35.
° 3MATRAZES DE ERLENMEYER.
° BALANZA GRANATARIA.
° AUTOCLAVE.
° CINTA TESTIGO.
° GASA (PARA QUE SEA LA TAPA DEL
MATRAZ AL MOMENTO DE ESTERILIZAR)
° ESPATULA.
PASO°2: ACONTINUACIÓN
VAMOS A TENER LISTO NUESTRO MATRAZ ERLENMEYER PARA VACIAR NUESTRO MEDIO CULTIVO
Y AGREGAR AGUA DESTILADA . PASO°3: YA QUE AIGAMOS CONCLUIDO EL PROCESO ANTERIOR LO QUE VAMOS HACER ES HACER UN TAPON CON ALGODÓN Y GASA Y CUBRIMOS CON UNA HOJA DE PAPEL Y ACEGURAMOS CON CINTA MASKIN PRENDEMOS NUESTRO MECHERO DE BUSEN PARA HACER LIGEROS MOVIMIENTOS CON NUESTRA MANO PARA QUE SE DISUELVA NUESTRO MEDIO DE CULTIVO.
.
PASO °4: LO QUE VAMOS HACER ACONTINUACIÓN ES ESTERILISAR
NUESTRO MEDIO DE CULTIVO QUE VA ASER 121°C,15lbs,15´ EN LA AUTOCLAVE , CUANDO
BALLAMOS A METER NUESTRO MEDIO DE CULTIVO EN LA AUTOCLAVE BAMOS A COLOCAR CINTA
TESTIGO EN NUESTRO MATRAZ ESTO NOS VA SERVIR PARA COMPROBAR QUE SI SE
ESTERILISO NUESTRO MEDIODE CULTIVO.
PASO°5: CUANDO NUESTRO MEDIO YA SE ESTERILISO LO VAMOS A
VACIAR EN UNA CAJA DE PETRI ESPERAMOS QUE ES ENFRIE PARA PODER VACIAR PARA ESTE
PROCEDIMIENTO VAMOS A OCUPAR UN MECHERO DE BUSEN QUE NOS CONDICIONES DE
ESTERILIDAD APROXIMADAMENTE EN UN RANGO DE 20 CM.
FOTO TOMADA POR ERIKA JASIBE MARTINEZ SORIANO
PASO°6: VACIAMOS NUESTRO MEDIO DE CULTIVO EN CONDICIONES DE ESTERILIDAD QUE NOS BRINDA EL MECHERO PROCURANDO, USAR CUBERBOCAS SINO LO HACEMOS PODEMOS HABLAR, TOSER, REIRNOS Y ESTO PUEDE OCUSIONAR QUE NUESTRO MEDIO DE CULTIVO NOS VA DAR RESULTADOS ERRONEOS Y NO EL RESULTADO ESPERADO TAPAMOS LO MANDAMOS A LA ESTUFA BACTERIOLOGICA A UN TEMPERATURA DE 37°C.
FOTO TOMADA POR ERIKA JACIBE MARTINEZ SORIANO.
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